LFSR（μl）：siRNA（pmol）剂量可(ke)以在0.04:1和0.12:1之间进(jin)行调整。

细(xi)(xi)胞密度过低导致细(xi)(xi)胞生长缓慢，对外来刺激变(bian)得(de)较(jiao)为敏感，使(shi)得(de)转(zhuan)(zhuan)染(ran)毒(du)性增高(gao)(gao)。细(xi)(xi)胞密度过高(gao)(gao)，会导致细(xi)(xi)胞发(fa)生接触抑制，加快细(xi)(xi)胞凋亡。细(xi)(xi)胞融合度达到60% - 70%时，转(zhuan)(zhuan)染(ran)可以取得(de)较(jiao)高(gao)(gao)的转(zhuan)(zhuan)染(ran)效率(lv)。可预实(shi)验优化细(xi)(xi)胞转(zhuan)(zhuan)染(ran)密度。

当转(zhuan)染(ran)(ran)体(ti)系(xi)中(zhong)存在多(duo)聚阴离子(zi)聚合物(wu)时(例如：硫酸葡聚糖、肝素等)，转(zhuan)染(ran)(ran)将无法正常进(jin)行，因此(ci)应避(bi)免上述(shu)物(wu)质存在于(yu)细(xi)胞转(zhuan)染(ran)(ran)体(ti)系(xi)中(zhong)。

应尽(jin)量使用适度传代接(jie)种(zhong)的细(xi)胞系，并尽(jin)量在平行实(shi)验时(shi)保持(chi)细(xi)胞传代次(ci)数的一致性，同时(shi)需(xu)避免细(xi)胞培养时(shi)间过长。

导致(zhi)转染(ran)时(shi)细胞(bao)毒(du)性大的(de)因素有很(hen)多，例如RNA的(de)用(yong)量(liang)过大、转染(ran)试剂的(de)用(yong)量(liang)过大、转染(ran)时(shi)细胞(bao)状态较差以及(ji)培养基中抗生(sheng)素的(de)加入等(deng)。建议严格按照所选择转染(ran)试剂的(de)说明书进(jin)行(xing)操作(zuo)，以避免细胞(bao)毒(du)性大的(de)问题。

内(nei)吞(tun)效率(lv)高说明基因(yin)可(ke)以(yi)被(bei)高效的(de)(de)(de)吞(tun)入细胞，证明复合(he)比(bi)例(li)、试(shi)剂及基因(yin)的(de)(de)(de)用(yong)量(liang)是没有(you)问题的(de)(de)(de)。蛋(dan)白表达量(liang)低(di)(di)分(fen)析可(ke)能有(you)如下2个(ge)(ge)原因(yin)：1）使(shi)用(yong)的(de)(de)(de)RNA本身蛋(dan)白表达量(liang)偏(pian)低(di)(di)，这个(ge)(ge)可(ke)能与RNA的(de)(de)(de)合(he)成序列有(you)关(guan)。2） 使(shi)用(yong)的(de)(de)(de)细胞属于难转细胞，基因(yin)在(zai)细胞内(nei)无法高效表达。

转(zhuan)染(ran)效果稳(wen)定(ding)(ding)(ding)性取决于(yu)(yu)转(zhuan)染(ran)试剂的稳(wen)定(ding)(ding)(ding)性和基因的稳(wen)定(ding)(ding)(ding)性。转(zhuan)染(ran)试剂应(ying)按照(zhao)说(shuo)明书建议(yi)(yi)的保存(cun)(cun)温度及条件进(jin)行保存(cun)(cun)。基因如短时(shi)间内(nei)连续使(shi)用，可放(fang)置(zhi)于(yu)(yu)4℃保存(cun)(cun)。若超(chao)过10天不使(shi)用，建议(yi)(yi)置(zhi)于(yu)(yu)-20℃或-80℃长期储(chu)存(cun)(cun)以(yi)降低核酸的降解速度。